杜鹃花的繁殖技术——组织培养

杜鹃花属植物大部分采用播种、扦插、嫁接繁殖的方式，一些名贵的高山杜鹃品种或新品种等因木本材料少和繁殖系数低，常采用组织培养进行繁殖。

外植体的种类、发育阶段以及年龄均是组织培养的成败因素。常用的外植体有茎段、种子、叶片、茎尖、花芽等。以种子为外植体时，外植体灭菌较容易，但后代存在分离现象；以带有侧芽的嫩茎段为外植体时，会受季节的限制。在杜鹃花组织培养时，通常选用未木质化的幼嫩枝条的茎段或茎尖，茎尖优于茎段，春季萌发的嫩茎优于秋季萌发的嫩茎。
 

 

外植体灭菌是植物组织培养中的重要环节，它不仅要求彻底杀死表面的微生物，而且不能伤害组织和表层细胞。采用的灭菌试剂一般有次氯酸钠、酒精、升汞等。升汞对杜鹃花外植体容易造成伤害，导致褐变甚至死亡，用酒精结合次氯酸钠灭菌效果较好。杜鹃花一般采用 75% 的酒精先消毒 15 ～ 30 s，再用5 %NaClO 消 毒 10 ～ 20 min 的 方 法。白宇清等对毛棉杜鹃的嫩茎进行组织培养研究，得出毛棉杜鹃外植体最佳的灭菌方法是用 70 % 的酒精处理 10 s，2 % 的NaClO 浸泡 15 min，无菌水冲洗 5 ～ 6 次。
 

 

培养基是离体材料赖以生存和发展的营养来源，因此基本培养基的选择直接关系着外植体的生长和发育。基本培养基因杜鹃花种类、品种及外植体种类而异。不同杜鹃适合的基本培养基会有差异，但均适宜低盐培养基。适合杜鹃花生长的培养基有 Anderson 培养基、WPM 培养基、1/4MS 培养基等。1975 年，AndersonW. C. 研究发现 MS 培养基中的盐分含量较高时对杜鹃产生了毒害作用，于是调整MS 培养基中的盐分比例，从而研制出改良 MS（1/4MS）培养基，并总结出可广泛应用于杜鹃花属组培的 Anderson 培养基。对银叶杜鹃（Rh. argyrophyllum）等使用 Anderson 培养基曾获得成功。1980 年，Lloyd 和 MeCown 研制出 WPM 培养基，是专门适用于木本植物的培养基。这种培养基对杜鹃花属植物非常奏效。对大叶杜鹃（Rh. faberi subsp. prattii）、桃叶杜鹃、大树杜鹃使用 WPM 培养基曾获得成功。1982 年，Read 培养耐寒落叶杜鹃时研制出 Read 培养基，对杂种杜鹃（Rh.hybrida）、锦绣杜鹃、映山红、迎红杜鹃等使用 Read 培养基培养获得成功。毛棉杜鹃在 WPM 培养基和 1/4MS 培养基上长势较好，在 MS 培养基上几乎无生长在 Read 培养基上生长最差，叶片变黄、变褐。
 

 

植物激素影响细胞的生长、发育、分化，进一步影响植物的形态形成。在组织培养中，适时、适量地选用适宜的植物激素非常重要。植物激素主要包括生长素和细胞分裂素：生长素类主要包括 IBA、IAA、NAA 等；细胞分裂素类主要包括玉米素（ZT）、激动素（KT）、6- 苄基氨基嘌呤（6-BA）、2- 异戊烯腺嘌呤（2-iP）、噻苯隆（TDZ）等，其中，ZT、KT 和 6-BA 是常用的细胞分裂素，而 2-iP 和 TDZ在近几年才应用于杜鹃花组织培养中。

杜鹃花初代诱芽培养即脱分化培养，因种类不同，所需要的生长素类、细胞分裂类激素的选择以及浓度比值不同。在初代培养中，生长素浓度不宜过高，最好不宜超过 0.1 mg/L，ZT 用量的增大对诱芽效应有明显的促进作用。

继代培养是指外植体接种一段时间后形成的愈伤组织或分化成苗的培养物重新转接到新的培养基上进行增殖培养的过程。ZT 是杜鹃属植物组织培养中诱导分化和增殖效果很好的外源激素。ZT 增殖效果非常明显，当浓度达到 3.0 mg/L 时，丛生芽增殖倍数达到 9 倍，此时的试管苗质量相对较差，出现试管苗细长瘦弱，甚至璃化的现象；当 ZT 浓度降低，并加入细胞生长素类激素如 IAA，可以提高试管苗的质量。TDZ 可诱导杜鹃花长出丛生芽，但是芽极短，将 TDZ 诱导的丛生芽转移到 2-iP 的培养基上可使丛生芽伸长。6-BA 抑制侧芽萌发、增殖。KT 作用下试管苗没有发生增殖。
 

3.生根培养激素选择
杜鹃花的生根培养可以在无细胞分裂素的、矿物元素含量较低的培养基上培养，生长素的浓度在 1.5 ～ 2.0 mg/L 为好。供生根培养的试管苗，最好株高在 3 cm 以上，具 5 片以上真叶，发育健壮。生根培养一般在 50 天后开始发根，70 天后根数达到5 ～ 6 根，根长 2 cm 以上。
 

 

当试管小苗根长 2 ～ 3 cm 时，即可把试管苗移入温室大棚中炼苗，使试管苗适应外界环境，当试管苗在大棚中炼苗 4 ～ 5 天，可把杜鹃花小苗从试管中轻轻地取出，放在水温为 25 ℃，pH 值为 5.0、含 0.01 % 多菌灵的溶液中冲洗掉细根上的琼脂，然后栽植在泥炭土、珍珠岩、椰糠以 3∶1∶1 的比例混合的土质中。在大棚中盆栽须注意遮阴、喷雾、排水等工作。